化冻过程的原则是要让冻存的细胞快速融化。
如果细胞储存在液氮液面下，使用者最好准备好必要的防护器具（至少要戴上护目镜，最好戴上面罩和较厚的手套），防止进入冻存管的液氮骤然膨胀引起爆炸而造成伤害。从冰箱或液氮罐取出细胞后将冻存管放 37℃水浴轻轻晃动使之化冻完全，注意不要让水浸到盖子以防污染发生。
由于大多防冻剂与细胞长时间接触时对细胞有毒害，所以最好尽快除去细胞冻存时加入的防冻剂。
防冻剂的去除方式和细胞的敏感性有关。有些细胞在某些防冻剂存在的条件下能很好的贴壁生长，可以直接将化冻的冻存细胞连同其冻存液加入预备好 15-20ml 培养液的细胞培养瓶或培养皿中，轻轻混匀后放入培养箱培养过夜后换培养液。
对于敏感细胞要加入 10ml 培养液中， 100xg 离心 5 分，去上清后加培养液轻轻重悬细胞，加入培养器皿后在培养箱培养，第二天更换培养液。